鹿流行性出血病（Epizootic Hemorrhagic Disease, EHD）是由环状病毒属病毒引起的急性传染性疾病，主要感染鹿科动物，具有高致死率和快速传播特点。该病通过吸血昆虫（如库蠓）传播，临床表现包括高热、黏膜出血、组织水肿和内脏坏死等。由于EHD对野生及养殖鹿群危害巨大，且与蓝舌病症状相似易混淆，精准的实验室检测成为疫病防控的核心环节。通过科学检测，不仅能明确病原、评估疫情风险，还能为疫苗研发和生物安全措施提供数据支持，是阻断病毒传播链的关键手段。
鹿流行性出血病的检测需覆盖病原学、血清学及分子生物学三个维度：
1. 病毒分离培养：通过采集患病鹿的血液、脾脏或淋巴结样本，接种敏感细胞系（如BHK-21或Vero细胞）进行病毒增殖，观察细胞病变效应（CPE），结合电镜鉴定病毒颗粒形态。
2. 血清学检测：采用酶联免疫吸附试验（ELISA）或琼脂扩散试验（AGID）检测血清中的特异性抗体，评估群体免疫状态或追溯感染史。
3. RT-PCR检测：针对EHD病毒保守基因（如VP7基因）设计引物，通过反转录聚合酶链反应扩增病毒核酸，可快速鉴定病毒血清型（如EHDV-1、EHDV-2等）。
4. 病理组织学检查：对死亡个体进行解剖，观察心脏、肺脏等器官的出血性病变，结合免疫组化技术确认病毒抗原分布。
EHD检测需遵循国际兽疫局（OIE）及各国动物疫病防控指南：
病毒分离：样本需在-70℃超低温保存，使用含抗生素的PBS缓冲液处理，接种细胞后每日观察CPE，7天内未出现病变需盲传三代确认阴性。
荧光定量RT-PCR：采用TaqMan探针法，设置内参基因（如β-actin）排除抑制物干扰，Ct值≤35判定为阳性，需同步进行测序验证特异性。
ELISA检测：使用重组VP2蛋白包被酶标板，血清稀释度≥1:40，OD值高于阴性对照2.1倍时判为抗体阳性，需设立标准阳性/阴性对照品控。
国内外主要参考以下标准实施检测：
1. OIE陆生动物诊断手册：规定EHDV分离鉴定、血清中和试验（SNT）的操作流程及结果判读标准。
2. GB/T 22915-2008：中国国家标准中明确RT-PCR检测引物序列、反应体系及扩增条件，要求检测实验室通过CNAS认证。
3. 质控要求：每批次检测需包含空白对照、阳性对照和阴性对照；分子检测需进行重复性验证，符合率应≥95%；血清学试剂盒灵敏度需≥90%，特异性≥85%。
通过多维度检测技术与标准化流程的结合，可实现对鹿流行性出血病的精准诊断，为全球鹿科动物疫病监测网络提供科学支撑。
